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日本島津色譜柱種類繁多,不同類型的色譜柱分離對象不同,因此,必須學會精準選擇液相色譜柱,在選擇色譜柱之前一定的認識和了解色譜柱的一些基本知識。今天從分離模式選擇、樣品信息、色譜柱參數等方面與大家聊一聊如何精準選擇一款合適的
日本島津色譜柱。
1、分離模式
液相色譜柱種類繁多,在精準選擇液相色譜柱之前,首先必須選擇HPLC的分離模式,根據使用的固定相和流動相的組合不同,可以得到下列各種各樣的分離模式。
2、了解樣品
了解待檢樣品的結構、分子量、溶解性、離子化、極性、pH值等物理化學性質,再參照下圖選擇適合的分離模式和精準的液相色譜柱固定相:
3、色譜柱參數
色譜柱性能影響因素有很多,例如,硅膠純度、色譜柱尺寸、顆粒形狀、粒徑、表面積、孔徑,化學性質包括鍵合類型、碳覆蓋率、封端,下面依次介紹各參數對色譜柱性能的影響,并根據以上參數精準地選擇液相色譜柱。
(1)硅膠純度
硅膠純度對強極性化合物的分離最為重要,殘留金屬離子濃度、硅膠的雜質會影響化合物的峰形,硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形,易發生拖尾。
(2)色譜柱尺寸
增加色譜柱長度,可以在一定程度上提高柱效,但也會升高壓力和導致峰展寬;含量測定、溶出檢測等對于分離的要求較低,可選用較短的色譜柱,減少運行時間。內徑大,提高載樣量,但也會增加橫向擴散,同樣會導致峰展寬。內徑小的色譜柱靈敏度較高,峰型更窄,但是載樣量較小。