血清使用中常見問題
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胎牛血清、新生牛血清、小牛血清有何區別?
胎牛血清:指健康母牛正常分娩前采集胎牛血液加工而成的血清,其胎球蛋白較多,血清白蛋白含量高,而r-球蛋白含量極低甚至沒有,并富含多種生長因子,是培養細胞zuiyou質的血清。
新生牛血清:指健康母牛正常分娩后不久采集加工而成的血清,其內含多種生長因子。
小牛血清:指出生后飼養一定時間(一周至六個月)再采集加工而成的血清,因與外界接觸時間過長,故血清內r-球蛋白含量較高,不利于細胞培養,特別是不利于病毒研究與疫苗生產。
1、 如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。
長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復凍融。建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
2、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產品性質。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。
3. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
4. 有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增
5. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀?
GIBICO的胎牛血清 沒有預老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反復凍融。
6. 如何避免沉淀物的產生?
解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。
解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。
請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
7、細胞培養中如何防止黑點生成?
(1)盡可能地減少血清凍融次數;
(2)培養基無需37℃水浴;
(3)培養基保持最佳PH值7.0-7.2;
(4)嚴格控制配制培養基的水質,容器定期刷洗;
(5)掌握細胞傳代的最佳時機,細胞切勿生長過老。
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