液相流動相稀釋劑的選擇
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分析方法開發，如何確定稀釋劑，確保方法的適用性。
1、稀釋劑的干擾
選擇稀釋劑，首先應考慮采用流動相體系，應關注以下幾點：
稀釋劑不得干擾已知雜質及主峰的檢測。
根據化合物的溶解特定，可適當加入助溶劑，但最好控制在5%以內，避免強溶劑效應。
允許對照品溶液與供試品溶液配制方式有差異，但對照品所添加的助溶劑一般應控制在2%以內，必免溶劑效應產生不良影響（如峰型、保留時間、峰響應等與供試品有差異，導致無法準確定量）。
2、關注各雜質及主成分的溶解度
通常有關物質方法中主成分的濃度較大（1mg/ml~10mg/ml），若主成分在稀釋劑中的濃度接近其飽和溶解度，可能出現以下三種情況：
供試品提取不充分，導致雜質測定結果偏低，部分未知雜質存在無法檢出風險。
供試品提取重現性差，導致雜質測定結果重現性差。
樣品在檢測過程中有析出，存在影響雜質準確定量的風險。
因此在進行方法摸索時，需測定相關主成分在稀釋劑中的飽和溶解度，最好滿足飽和溶解度大于3倍的供試品濃度。
3、關注各雜質及主成分的穩定性
基于雜質譜分析，配制混標，考察混標中各雜質及主成分的穩定性。
部分雜質峰面積明顯降低，可根據該類型化合物的結構特點，調整稀釋劑的組成或注明供試品溶液的保存條件（如避光、冷藏等）。
部分雜質峰面積明顯升高，結合主成分的結構特點，調整稀釋劑的組成或注明供試品溶液的保存條件（如避光、冷藏等）。
“臨用新制"，應注明時間，確保測定數據的準確性。若穩定性小于方法運行時間，個人認為是不可接受的。
4、關注溶劑效應
溶劑效應原定義為溶劑對于反應速率、平衡甚至反應機理的影響。針對于分析方法，主要指的是對溶解平衡的影響，涉及稀釋劑與流動相、流動相與固定相。
4.1、稀釋劑選擇不當引起的溶劑效應-現象及原理
樣品溶液的溶劑強度強于流動相溶劑強度時可能會造成的峰展寬、峰分叉現象，其過程為當溶解樣品的溶劑不同于流動相時，樣品溶劑與流動相發生混合，樣品溶劑被沖稀。如果進樣溶劑之強度高于流動相，樣品在瞬間會表現為在較強溶劑中，并以較快速度通過色譜柱。色譜行為就是∶色譜峰的保留時間縮短。`當進樣溶劑與流動相混合時，一部分分子會先與流動相混合，致使這些分子通過色譜柱的速度發生變化，使峰形扭曲，發生變形。
4.2、稀釋劑選擇不當引起的溶劑效應-如何判定
通過HPLC儀器比對一下兩個劈叉峰的紫外吸收波譜，第一就是通過HPLC儀器比對一下兩個劈叉峰的紫外吸收波譜，看看他們是否能*一樣的μV特征吸收，第二將進樣體積調節到0.1μl看看，峰是否好轉，如果滿足上面兩個條件幾乎就可以肯定是100%的溶劑效應。
4.3、稀釋劑選擇不當引起的溶劑效應-如何避免
降低稀釋的強度（如增加水相比例、調整pH等）或更換稀釋劑為流動相，2、在保證檢測靈敏度的前提下，降低進樣量。3、增加峰形前延抑制器，峰形前延抑制器的設計原理是，在色譜柱前端引入一個大小合適的空腔，使樣品到達色譜前被存留于空腔內的流動相（色譜柱平衡時流動相會充滿空腔）稀釋，使“樣品溶劑"經稀釋后更接近流動相的組成，實現“樣品溶劑與流動相的組成接近"，并取代“用流動相溶解樣品"的解決方案。
4.4、基質效應（溶劑效應的一個變種）
基質效應是指檢測系統檢測樣品中的分析物時，處于分析物周圍的所有非分析物質對分析物測定的影響。產生基質效應的原因與以下四個因素有關：儀器的設計、試劑的組成成分、測試方法的原理、質控材料的組成及處理技術等，通過回收率可以評估分析方法是否受基質效應的影響，一般若回收率普遍偏低、偏高或波動較大，建議考慮基質效應的影響。
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